巴氏染色液使用場(chǎng)所應(yīng)通風(fēng),并遠(yuǎn)離火源,涂片厚薄適宜,固定后方可染色;制片用高于95%以上濃度的乙醇固定后會(huì)出現(xiàn)染色過(guò)深,應(yīng)用95%乙醇固定。蘇木精染液上有一層金屬膜,下有結(jié)晶沉淀,使用前應(yīng)用濾紙過(guò)濾;蘇木精染液在染夠2000~3000張玻片后應(yīng)更換新的染液;蘇木精的染色時(shí)間隨氣溫和染液情況而改。染液以覆蓋涂片為宜,過(guò)少因蒸發(fā)導(dǎo)致染料沉淀.
鹽酸酒精分化的作用為分化掉胞漿上沾上的蘇木素,因此時(shí)間不宜長(zhǎng),但如果分化不夠,會(huì)造成細(xì)胞核顏色過(guò)深或(及)胞漿很難上色;分化后立即用自來(lái)水沖洗,不宜久置,否則可使全部顏色消失。返藍(lán)亦稱(chēng)堿化,返藍(lán)時(shí)間偏短則著色不充分,影響染色效果,碳酸鋰每缸過(guò)500張玻片更新。
操作巴氏染色液技術(shù)人員要流暢,動(dòng)作干凈利落,不可把上一缸染色液帶入下一缸,每缸交替時(shí)要甩干玻片上殘存液體。細(xì)胞漿著色不佳應(yīng)考慮的因素,如果全片內(nèi)胞漿都淡染,則需延長(zhǎng)染色時(shí)間或更換新液。如果胞漿不分色或均為淺紅色,適當(dāng)增加染色時(shí)間能夠部分糾正不分色狀況。胞漿染成灰色或紫色是由于蘇木素染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或鹽酸酒精分化不佳,經(jīng)過(guò)褪色后重新蘇木素染色可以糾正。由于標(biāo)本的不同,同樣配方的EA染液可造成偏藍(lán)、偏綠和偏紅,對(duì)不同的標(biāo)本應(yīng)使用不同的EA染液,一般認(rèn)為:EA36和EA50較適用于婦科標(biāo)本,而EA65或改良EA較適用于非婦科標(biāo)本。
巴氏染色液詳細(xì)介紹,將涂片置于95%乙醇中固定15 分鐘以上,依次浸入80%、50%乙醇中各30 秒,水洗1~2分鐘,甩干,浸入蘇木精染液中3~5分鐘,水洗1~2分鐘,甩干,浸入鹽酸酒精分化液中分化數(shù)秒,水洗1~2分鐘,甩干。浸入返藍(lán)液中數(shù)秒,水洗1~2 分鐘,甩干。置于95%乙醇中漂洗,水洗甩干。浸入橘黃G染液中染1~3分鐘;95%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇中漂洗各1次,時(shí)間各10~20秒。浸入EA36染液(或EA50染液)中染色2~5分鐘,95%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇中漂洗各1次,時(shí)間各10~20秒。浸入浸蠟脫蠟透明液中2分鐘。中性樹(shù)膠封固,鏡檢。