斑貼試驗(yàn)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法，主要用于鑒定細(xì)菌的血清學(xué)分類和鑒別。在斑貼試驗(yàn)中，通過將一種特定的血清涂在細(xì)菌表面上，觀察細(xì)菌與血清反應(yīng)的情況，來推測細(xì)菌的種類和特性。本文將詳細(xì)介紹其步驟。
 

　　一、實(shí)驗(yàn)器材
 

　　首先需要準(zhǔn)備的是實(shí)驗(yàn)器材。主要有以下幾種：
 

　　1.試管：用于懸浮細(xì)菌。
 

　　2.離心管：用于進(jìn)行離心。
 

　　3.離心機(jī)：用于離心。
 

　　4.滴定針：用于取樣。
 

　　5.試驗(yàn)板：用于固定細(xì)菌。
 

　　6.無毒性普魯士藍(lán)鹽酸鹽：用于檢測斑點(diǎn)。
 

　　7.脫氧膽酸：可使細(xì)菌細(xì)胞壁破裂，釋放抗原。
 

　　8.磷緩沖液：用于稀釋抗原和血清。
 

　　9.乳化器：用于使血清與抗原混合。
 

　　10.洗滌緩沖液：用于清洗試驗(yàn)板。
 

　　11.組織塊刀：用于切取細(xì)菌。
 

　　二、實(shí)驗(yàn)步驟
 

　　1.準(zhǔn)備工作
 

　　a.準(zhǔn)備細(xì)菌液：用熒光顯微鏡檢測活菌及其腫脹度，將細(xì)菌懸浮在磷緩沖液中，搖勻后離心，取上清液。
 

　　b.制備抗原液：將細(xì)菌取上清液和脫氧膽酸混合，振蕩。
 

　　c.制備血清液：從鑒定正常動物、正常人或鑒定過該種病菌的患者的全血中，經(jīng)離心制成的腫脹度合適的血清。
 

　　注：處理時(shí)注意消毒，防止污染。
 

　　2.制備孔板
 

　　取一張孔板，加入一個(gè)滴定單位(約30微升)的抗原液到每個(gè)孔中，等孔板干燥好。
 

　　3.孔板實(shí)驗(yàn)
 

　　a.采用或制備的抗血清，加入各個(gè)孔中，干燥后在37℃溫箱中孵育。
 

　　b.在隔夜培養(yǎng)的試驗(yàn)菌中，PDA或NA培養(yǎng)基上切取一枚直徑約2毫米細(xì)菌菌落，用滴定針在孔中放入一滴解膠體滴定溶液，壓在菌落上壓一下。
 

　　c.將孔板保持在水平面上，用細(xì)胞培養(yǎng)箱中備好的恒溫環(huán)境下，孵育24小時(shí)。
 

　　d.將孔板用無毒性普魯士藍(lán)鹽酸鹽染色，觀察每個(gè)孔的反應(yīng)情況。
 

　　4.結(jié)果判定
 

　　反應(yīng)陰性的孔，一個(gè)小的斑貼點(diǎn)也沒有，可認(rèn)定此菌株不與該抗血清反應(yīng)。
 

　　反應(yīng)陽性的孔，有一個(gè)小的斑貼點(diǎn)出現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)作為深入研究的對象。
 

　　總之，斑貼試驗(yàn)是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)方法，可用于確定細(xì)菌種類和特性，從而指導(dǎo)臨床治療和疾病控制。實(shí)驗(yàn)步驟簡單，但是需要注意消毒衛(wèi)生和實(shí)驗(yàn)器材的準(zhǔn)備工作，以獲得準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。